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我可以用酒精做微生物样品的保护剂吗?

作者:Michelle Tetreault Carlson 来源:美国MoBio实验室【字号:

欢迎回来!我们将继续回来与大家一起分享一些新颖的不一样的想法。分享一些客户常问的技术问题,以及我们的回答。科学家们提出了使用我们产品过程中遇到的问题,我们给与了回答,还有什么比这个更节省您的时间?

这周我们我们讨论:为什么用酒精作为防腐剂保存环境样品不是个好主意?

问:我们想用PowerSoil DNA Isolation Kit提取从物体表面采集的棉拭子DNA。

对方法上是否有比较好的建议?通常我们会先润湿灭菌面前,擦拭物体表面,然后把面前浸入到溶液中(可能是70%乙醇)。经过适当浸泡后,转移一些溶液到PowerBead Tubes中,然后按照说明书进行提取。使用酒精会影响提取结果吗?

有没有从物体表面(如门把等)上采集样品建议操作方法吗?

非常感谢!

虽然酒精能成功地保护龙舌兰虫的DNA,但对细菌并不合用。为什么呢?因为酒精常用于进行分子鉴定前对实验操作台进行消毒处理。我们用酒精灭菌。如果用酒精保存用于微生物组分析的棉拭子、土壤等其它样品,你会获得擦拭实验操作台同样结果。酒精会杀死几乎所有微生物。当细胞壁消失后,DNA会被释放到上清液中,从可溶的杂质中分离DNA将非常困难。

我们曾经尝试分别从用100%、70%和50%酒精保存的土样中提取DNA,结果是失败的。用酒精保存的水样滤膜也同样失败。没有任何价值。

对于棉拭子,最好的保存运输条件是干燥。干燥的物体表面,只要刮取你要检测的地方即可,不需要用到盐水。而口腔棉拭子或湿的样品,让其在空气中自然干燥,然后可在-20℃长期保存或运输,室温也可以。当拭子为干燥状态,上面沾染到的细菌和真菌就停止生长。我们需要的不是消毒。

因为DNA这种强壮的分子能在环境中保存相当长一段时间,所有我们通常建议土样或水样滤膜干燥、冷冻保存和运输。土样在不同温度条件下长期保存过程中发生变化的相关数据正在收集当中。有了结果后我们会先大家公布。

同时,我们建议准备使用RNA PowerSoil Kit提取RNA的土样加入LifeGuard Soil Preservation Solution。加入LifeGuard后的土样还应该尽快放入到冰箱,最好是-20℃,以获得最原始的RNA当然剪影。这是因为RNA表达随着环境的变化发生突然改变。当样品放入到溶液中,微生物的生长繁殖就停止了。

对基于DNA的微生物组学研究,因为基因组当然不会马上发生改变,原始状态保存土壤不加任何额外液体是最简单、最少干扰和最省钱的办法。

让你的微生物样品远离酒精吧。如果你要研究龙舌兰蝴蝶幼虫,它是一种很好的防腐剂。是有效放腐,不是消化。如果你想知道门把手或土壤中有哪些微生物,就让它们保持在原始的生长基质中,或干燥的滤纸或棉拭子。它们跟DNA一起保持静止、完整。

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